11 Le Test ELISA

La technique de dosage d’immunoabsorption par enzyme liée ou test ELISA ( Enzyme-Linked Immuno Assay en anglais) est principalement utilisée en immunologie afin de détecter et/ou doser la présence de protéines, d’antigènes ou d’anticorps dans un sérum. Elle est utilisée notamment pour le dépistage du VIH, et permet de déterminer la séropositivité ou séronégativité d’un individu.

Il existe plusieurs types de tests ELISA mais celui présenté dans la vidéo est un test ELISA indirect.

Le test ELISA indirect consiste à détecter la présence d’un anticorps spécifique dans un échantillon de sérum. On ne cherche pas directement l'AG mais une molécule qui réagit avec lui, c'est à dire l'AC. Si l'AC est présent c'est que l'AG est présent.

 

Pour cela il faut disposer  :

  • D’un échantillon de sérum à analyser

  • D’un AG connu spécifique à l’AC  recherché

  • D’un anticorps traceur dirigé contre les anticorps humain et couplé à une enzyme (la peroxydase)

  • Du substrat spécifique à l’enzyme, ici du TMB ( 3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine )

 

Plaquette de puits :

source : Microtiter plate.JPG, via wikimedia commons, par Jeffrey M. Vinocur, Own work, attribution required (Multi-license with GFDL and Creative Commons CC-BY 2.5),https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Microtiter_plate.JPG?uselang=fr

 

Le test comporte quatre étapes principales :

  • Fixation de l’antigène : L’antigène connu, spécifique à l’anticorps recherché, est fixé de manière électrostatique au fond de cupules de test (de puits).  Les puits sont ensuite lavés pour enlever les antigènes non fixés.

  • Fixation de l’anticorps à détecter: On verse le sérum à tester dans le puit. S’ils sont présents, les anticorps spécifiques vont se fixer aux antigènes au fond du puit. Un lavage des puits est effectué pour enlever les anticorps non fixés.

  • Fixation de l’anticorps traceur : On verse dans le puit la solution contenant les anticorps traceurs. Ceux-ci ne peuvent se fixer qu’uniquement sur des anticorps humains. Ainsi si des anticorps humains dirigés contre l’antigène du puits ont été fixés à l’étape précédent, les anticorps traceurs pourront se fixer sur ceux-ci lors de cette étape. Dans le cas contraire ils seront éliminés lors du rinçage.

  • Révélation : On verse dans le puits la solution contenant le substrat de l’enzyme fixée à  l’anticorps traceur. Ce substrat ne pourra être transformé en produit que si le puits contient l’enzyme, c’est à dire si le puits contient des anticorps traceurs fixés aux anticorps humains eux même  fixés aux antigènes situés au fond du puit. Le produit formé est de couleur bleue. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité d’enzyme présente et donc à la concentration d’anticorps recherchés. Un puits bleu indique une séropositivité et un puit incolore traduit une séronégativité.

Protocole et résultat d’un test ELISA indirect :

 

source : ELISA indirect chem114a.jpg par Tinastella sur Wikibooks anglais via Wikimedia commons, Domaine public, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Indirect_ELISA_chem114a.jpg

 

Le test ELISA dit en Sandwich fonctionne différemment : il consiste à détecter dans un sérum la présence d'antigènes.

Au fond des puits se trouvent des anticorps dirigés contre un antigène donné. Si le sérum du patient contient l’antigène celui-ci sera fixé par les anticorps accrochés au fond du puits. L’anticorps traceur est un anticorps également dirigé contre l’antigène et possédant une enzyme de révélation : l’antigène est pris en sandwich entre deux anticorps.

 

Représentation en cas de séropositivité dans un Test ELISA en sandwich : 

Étoile rouge : AG

Rond jaune : enzyme

 

source : Elisa po?rednia i bezpo?rednia.svg, par Wektoryzacja Harkonnen2 via wikimedia commons,  CC-BY-SA-3.0-migréhttps://commons.wikimedia.org/wiki/File:Elisa_po%C5%9Brednia_i_bezpo%C5%9Brednia.svg

 

Résultats d’un test ELISA :

Patient A : séronégatif

Patient B : séropositif, faible concentration d’AC, infection ancienne

Patient C : séropositif, forte concentration d’AC, infection récente

 

source : Mock ELISA results.png, via Wikimedia commons, par Gurustip sur Wikibooks anglais, domaine public, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mock_ELISA_results.png

 

 

 

Plaquette de résultats Sandwich à double anticorps «Anti IgG humaine»:

source : ELISA.jpg, par BiotechMichael , via wikimedia commons, domaine public, https://en.m.wikipedia.org/wiki/File:ELISA.jpg

Immunité adaptative 4 : Test Elisa - SVT - SANTÉ 1ère spé #11 - Mathrix

Date de dernière mise à jour : 26/03/2022